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異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)是β–半乳糖苷酶的活性誘導物質,常用于藍白斑篩選及誘導的細菌內的蛋白表達等。當pUC系列的載體DNA(或其他帶有l(wèi)acZ 基因載體DNA)以lacZ 缺失細胞為宿主進行轉化時、或用M13噬菌體的載體DNA進行轉染時,如果在平板培養(yǎng)基中加入X–Gal和本產品,由于β–半乳糖苷酶的α–互補性,可以根據是否呈現(xiàn)白色菌落(或噬菌斑)而方便地挑選出基因重組體
X-gal是β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)的顯色底物,在β-半乳糖苷酶的催化下會產生藍色產物。基于這個特點,當pUC系列載體DNA以lacZ 缺欠細胞作為宿主進行轉化時,或M13噬菌體載體DNA進行轉染時,如果在培養(yǎng)基中加入本產品和IPTG,由于β–半乳糖苷酶的α–互補性,可以根據是否呈現(xiàn)白色而方便地挑選擇出基因重組體。
氯霉素(Chloramphenicol)是一種廣譜抗生素,通過與50S核糖體亞基結合,抑制氨酰-tRNA連接到核糖體,阻斷肽酰轉移酶步驟,從而抑制蛋白質合成,還能抑制葉綠體和線粒體蛋白質合成,和核糖體產生(p)ppGpp,抑制RNA轉錄,通常用作一種抑菌劑。有效作用于各種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌,特別是引起腦膜炎的細菌,常用來研究蛋白質合成和篩選氯霉素抗性基因的轉化。
鏈霉素(Streptomycin)是一種氨基糖苷類抗生素,通過與30S核糖體結合致使mRNA誤讀,從而抑制蛋白質的合成。對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有效。鏈霉素可在細胞培養(yǎng)中抑制細菌污染;分子生物學中,常用來篩選成功轉化鏈霉素基因的細菌克隆。
羧芐青霉素(Carbenicillin)是一種結構類似青霉素的β-內酰胺類抗生素。不同于大多數(shù)β-內酰胺,此抗生素主要作用于包括銅綠假單胞菌和常見腸道菌在內的革蘭氏陰性菌。其作用機制在于失活細菌細胞膜內部的轉肽酶,進而抑制細菌細胞壁的合成,終導致細菌死亡。因其穩(wěn)定性提高,常替代青霉素用于篩選步驟,能有效減少衛(wèi)星菌落生成。另外,常用在植物培養(yǎng)中,以調解細菌生長,使其再生頻率顯
四環(huán)素(Tetracycline)是一種光譜型抗生素,靶向抑制各種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌,以及某些真核細胞的生長。其作用機制在于:主動擴散穿透細胞膜上的質子通道,進入細胞后與30S核糖體結合,通過阻止氨基酰-tRNA轉移到mRNA-核糖體復合物上的受體部位(A部位),從而抑制蛋白質合成。四環(huán)素還能與細菌50S核糖體亞基結合,改變細胞膜結構,導致細胞內含物流出。這些抑制效應通過清洗步驟即可逆轉,
卡那霉素(Kanamycin)是一種氨基糖苷類抗生素,通過與30S核糖體結合致使mRNA誤讀,從而抑制蛋白質的合成。對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有效。卡那霉素可在細胞培養(yǎng)中抑制細菌污染;分子生物學中,常用來篩選成功轉化卡那霉素基因的細菌克隆;也常用于農桿菌介導的轉化實驗,選擇性篩選攜帶npt Ⅱ(APH3)基因的植物組織。
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